Ugrás a tartalomhoz

Fermentációs biotechnológia

Dr. Kutasi József (2007)

Glia Kft.

Élelmiszeripari termékek rekombinációja (pl. Almasav előállítás)

Élelmiszeripari termékek rekombinációja (pl. Almasav előállítás)

Citrát kör alapú előállítás: A fumaráz enzim termelődéséért felelős gén, a fum1 egy erős indukáló promóter mögött van, így nagy mennyiségben termelődik az almasav anélkül, hogy nem kívánatos fumársav termelődne. A Gal 10 expressziós rendszert kell használni induktornak, amikor a Gal 10 promóterét kell inzertálni a plazmidba a gén elé. Így majd galaktóz tartalmú táptalajon nevelt élesztőkultúra sok fumarázt fog majd termelni. A pG5/T2 vektor fum1 génjét a pUC18 vektor multilpe cloning site-jába kell inzertálni, majd ennek a Sal1/Hind3 fragmentjét, ami tartalmazza a kívánt régiót, ki kell vágni a megfelelő enzimekkel, majd be kell inzertálni a YEp51 vektor GAL promótere mögé. Ez a pFT2 vektor. Ha ezt a vektort sikerül előállítani, majd élesztőbe bevinni, az így előállított élesztőt galaktóz és fumársav tartalmú tápoldaton kell nevelni.

Reduktív citrát kör alapú előállítás: Az eddigi kísérletek során az RSA1 fragmentet, ami az mdh2 gént tartalmazza, az EcoRV vektorba klónozták, felszaporították, majd beépítették az Yep51 vektor Sal1 és BamH2 hasítóhelyek közé, valamint a PRS-420-PGK vektor Sal1 és Sac1 hasítóhelyei közé. A további műveleteket az előző kísérlethez hasonlóan hajtották végre. Az így kapott élesztőt 2% galaktóz tartalmú SD tápoldaton kell nevelni stacionárius fázisig, majd 3000*10g-on centrifugálni kell 4 oC-on 5 percig, majd steril salin oldattal mosni kell. Ezután olyan oldatban kell szuszpendálni, ami 1M fumársavat, 0,2% natrium-deoxklorátot tartalmaz. Ezt kell inkubálni 37 oC-on, meg kell savanyítani pH=2-re, fugával el kell távolítani a sejteket. A felülúszó tartalmazza a kívánt almasavat.