Ugrás a tartalomhoz

Molekuláris terápiák

Dr. Balajthy Zoltán, Dr. Aradi János, Dr. Balajthy Zoltán, Dr. Csősz Éva, Dr. Scholtz Beáta, Dr. Szatmári István, Dr. Tőzsér József, Dr. Varga Tamás (2011)

Debreceni Egyetem

5.2. A terápiás antitestek termelése

5.2. A terápiás antitestek termelése

Paul Ehrlich a XX. század elején alkotta meg az ún. magic bullet elméletét, amely olyan anyagra vonatkozik, amely szelektíven hozzákötődik a patogénhez és a hozzá kapcsolt toxin segítségével specifikusan elöli a patogént.

Az első monoklonális antitesteket 1973-ban hozta létre Jerrold Schwaber és George Pieczenik humán-egér hibrid sejtekben, majd Georges J.F. Kohler és César Milstein továbbfejlesztette a technikát, amiért 1984-ben Orvosi Nobel díjat kaptak (megosztva Niels K. Jerne-vel). Az antitestek humanizálása 1988-ban kezdődött Georg Winter munkája révén.

Antitestek termelésére különböző technikákat használnak:

  • Egérben – hibridóma sejtek létrehozásával – egér antitestek termelése

  • Sejtkultúrákban – rekombináns humanizált antitestek termelése

  • Genetikailag módosított egérben – humanizált/humán antitestek termelése

  • Fág diszplay révén – módosított humán antitestek létrehozása

5.2.1. Antitestek termelése hibridómákban

A hibridóma olyan immortalizált, antitesttermelésre képes sejt, amely mielóma sejt (korlátlan osztódást biztosít) és immunizált egér lépsejt (antitesttermelésre képes) fúziójával keletkezett.

Az egeret immunizálják a megfelelő antigénnel, majd az egérből izolált lépsejteket fuzionáltatják mielóma sejtekkel. A mielóma sejtek nem tartalmaznak hipoxantin-guanin-foszforibozil-transzferáz (HGPRT) enzimet, ezért csak a fúziós sejtek tudnak túlélni a speciális médiumban. A nem fuzionált B sejtek is tartalmazzák ezt az enzimet, de élettartamuk rövid, gyorsan elpusztulnak. Az előállított hibridóma sejteket tovább szaporítják és az általuk termelt antitesteket a tápfolyadékból kinyerik.

A módszerrel egér monoklonális antitestek nyerhetők. Ez a módszer az antitest termelés egyik legelterjedtebb módja, elsősorban diagnosztikus és egyéb antitestek termelésére javasolt. Terápiás antitestek termelésére kevésbé használatos, ugyanis többszöri alkalmazás során allergiás reakciók léphetnek fel, egér ellenes humán antitestek (HAMA – human anti mouse antibody) képződhetnek.

5.8. ábra - 5.8. ábra. Antitestek termelése hibridómákban.

5.8. ábra. Antitestek termelése hibridómákban.

5.2.2. Humanizált antitestek

A humanizált antitest egy olyan rekombináns fehérje, amely egér és humán szekvenciákat egyaránt tartalmaz. A humanizálás folyamán az egér antitest egyes részeit humánra cserélik azzal a céllal, hogy az egér ellenes humán antitestek (HAMA) termelődését kivédjék; az antitesteket általában emlős sejtkultúrákban termeltetik.

5.9. ábra - 5.9. ábra. Humanizált antitestek termelése

5.9. ábra. Humanizált antitestek termelése

Nagy előnye, hogy nem lép fel nem humán fehérjék elleni immunreakció. A termelés in vitro is megvalósítható. Két jól bevált módszert használnak

  • Fág diszplay

  • Olyan génmódosított egérben termelik az antitesteket, amelyek humán antitestet termelnek.

5.10. ábra - 5.10. ábra. Humán antitestek termelése génmódosított egerekben.

5.10. ábra. Humán antitestek termelése génmódosított egerekben.